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FSQ-301
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    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover,(gDNA去除型)
    商家編碼:
    市 場 價:2800.00
    售      價:1000.00 請登錄,確認是否享受優惠
    銷量:1 評價:0
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    1000.00 庫存:999
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    • 應用: qPCR專用RT試劑盒



    最適用于Realtime PCR用cDNA合成的預混型逆轉錄試劑。

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆轉錄酶『ReverTra Ace』開發的Realtime PCR用的逆轉錄試劑盒,是包含逆轉錄反應用的所有組分的5×濃度的完全預混型試劑,只需添加模板RNA和水即可迅速地開始反應。另外,由于采用了最適用于Realtime PCR用短鏈目的片段cDNA合成的反應組成,可在短時間內高效率地制備適用于Realtime PCR的cDNA模板。
     

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)中添附了具有強力DNA分解活性的gDNA Remover,通過在逆轉錄反應前處理模板RNA,可簡便地制備不含基因組DNA的cDNA。最適用于檢測目的基因中存在假基因,或無法在橫跨內含子的位置上設計引物,模板RNA中有基因組DNA殘留問題等Realtime PCR實驗。

    【相關產品】Realtime PCR試劑的詳細內容請點擊這里
     特征

    特征1. 完全預混型試劑
    本試劑是在?20℃條件下也不會凍結的完全預混型試劑。只需添加模板RNA和水,即可簡便地合成重復性良好的cDNA。
     
    特征2. 逆轉錄反應(?)對照溶液容易配制
    由于添附有同樣預混型的no-RT Control,逆轉錄反應(?)對照溶液也很容易配制。

    特征3. 實現了更廣的可定量擴增區域(dynamic rang)
    由于采用了Oligo dT和Random Primer按最佳比例混合的primer mix,RNA的整個區域可進行均一、高效率的逆轉錄反應。因此,可對更廣的可定量擴增區域進行分析。

    特征4. 與Realtime PCR試劑的高適應性
    采用了對Realtime PCR的反應體系影響最小的組分,即便向PCR反應液中帶入最多20%液量的逆轉錄反應液,也能顯示出很好的線性。最適用于低表達量mRNA的高靈敏度檢測。

    特征5. 可簡便、迅速地去除基因組DNA
    按順序添加去除基因組DNA的試劑和逆轉錄反應試劑,只需20分鐘即可配制不含基因組DNA的cDNA。

     

     實驗例
     實驗例1 與其他公司預混型cDNA合成試劑逆轉錄反應效率(cDNA合成量)的比較

    以HeLa total RNA100ng為模板,按各公司試劑盒的推薦條件進行逆轉錄反應,再用Realtime PCR對5種目的基因進行定量。
    結果可見,用本試劑盒可得到最高合成量。

    ●cDNA合成
    試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及其他公司同類型(預混型)產品
    模板:HeLa total RNA 100ng /10μl反應體系
    反應條件:各公司試劑盒推薦的條件

    ●Realtime PCR
    試劑:THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
    目的片段:代表性基因5種
    測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

     實驗例2 模板RNA量對合成效率的影響(標準曲線直線性的確認)

    為評價模板RNA量對逆轉錄合成效率的影響,以HeLa total RNA 2pg?2μg(8個梯度)為模板進行逆轉錄反應,再用Realtime PCR對5種目的基因進行定量。結果可見,5種目的基因的標準曲線沒有交叉,顯示了很好的直線性。由此可見,用本試劑盒可對各種濃度范圍的RNA進行同等效率的逆轉錄。

    ●cDNA合成
    試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)
    模板:HeLa total RNA 2pg-2μg /20μl反應體系

    ●Realtime PCR
    試劑:THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
    目的片段:代表性House Keeping Gene 5種
    測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT



     實驗例3 gDNA Remover去除基因組DNA效果的確認


    為了確認gDNA Remover去除基因組DNA的效果,按以下條件進行了逆轉錄反應,再以β-Actin為目的片段進行Realtime 
    PCR。
    結果可見,gDNA Remover處理(+)、逆轉錄(?)〈下面③〉的條件下無法確認到擴增,說明基因組DNA已被去除。

    ●cDNA合成
    試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)
    模板:自制的HeLa total RNA 0.5μg /10μl反應體系
    條件:用gDNA Remover添加(+)、或不添加(?)的4×DN Master Mix去除gDNA后,再分別用5×RT Master MixⅡ或5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control進行逆轉錄反應

    ●Realtime PCR
    試劑:THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
    目的片段:ACTB(188bp)
    測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

     實驗例4 與其他公司同類型產品去除基因組DNA效果的比較


    向HeLa total RNA中添加過量的人基因組DNA,通過該實驗,與其他公司同類型產品比較去除基因組DNA的效果。
    結果可見,ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover去除基因組DNA的效果最好。

    ●cDNA合成
    試劑:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)及其他公司同類型試劑盒2種
    模板:HeLa total RNA(0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng,100ng, 1μg)+人gDNA 100ng/20μl反應體系
    條件:各公司試劑盒的推薦條件
    ●Realtime PCR
    試劑:THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反應體系(帶入量10%)
    目的片段:ACTB(188bp)
    測定用儀器:Applied Biosystems 7900HT

     簡要備注

    Q1. 推薦反應時間為15分鐘,如果延長時間能否提高cDNA的合成量?
    A1. tRNA等量很多的RNA全部進行逆轉錄反應時,延長反應時間可提高收量,但一般情況下推薦37℃15分鐘可得到足夠的cDNA。

    Q2. 哪些RNA可作為模板RNA使用?  
     
    A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。

    Q.3 是否需要RNase H處理?  
     A3. 由于模板RNA的殘留會對PCR產生抑制作用,一般情況下,逆轉錄反應結束后需通過RNase H對模板RNA進行分解。但本試劑盒采用了本公司新開發的系統,模板RNA在逆轉錄反應后會被非酶性去除,因此逆轉錄反應后無需進行RNase H處理。

     參考文獻

    1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219?2226(2003)
    2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59?66(2002)
    3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241?246(2002)
    4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453?5460(2001)
    5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666?675(2000)
    6)S.Lee et al.,Gene,245:253?266(2000)

     價格表

    (點擊品名即可下載產品說明書)

    品名及內容包裝保存
    溫度
    Code No.價格

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix
    ?5×RT Master Mix
    ?5×RT Master Mix no-RT Control
    ?Nuclease-free Water

    200次份*

    -20℃FSQ-201

    RMB 2,000

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover
    ?gDNA Remover
       ?4×DN Master Mix
       ?5×RT Master Mix II 
    ?5×RT Master Mix II no-RT Control
    ?Nuclease-free Water

    200次份*

    -20℃FSQ-301

    RMB 2,800

    *10μl反應體系的次數。

    ※ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)的5×RT Master Mix及5×RT Master Mix no-RT Control與ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)的5×RT Master Mix Ⅱ 及5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control 組成各不相同,請勿混用。

     相關產品價格表

    (點擊品名即可下載使用說明書)

     

     品名及內容 包裝保存
    溫度
     Code No. 價格

    ReverTra Ace qPCR RT Kit
     ?5×RT Buffer
     ?Enzyme Mix
     ?Primer Mix
      (oligo dT+Random primer)
     ?Nuclease-free Water

    200次份*-20℃FSQ-101


    ¥1,500 


    *10μl反應體系時的使用次數

    <高效率Realtime PCR用試劑>

     品名 包裝 保存
    溫度
     Code No. 價格
    THUNDERBIRD Probe qPCR Mix1ml x 1支
      [40次份*]
    1.67ml x 3支
      [200次份*]
    (1.67ml x 3支)×5
      [1000次份*]

    (1.67ml x 3支)×10
      [2000次份*]
     -20℃

    QPS-101T

    QPS-101

    QPS-101B

    QPS-101C


    ¥325

    ¥1,500 


    ¥6,900 

     ¥12,700 

    THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix1ml x 1支
      [40次份*]
    1.67ml x 3支
      [200次份*]
    (1.67ml x 3支)×5
      [1000次份*]
    (1.67ml x 3支)×10
      [2000次份*]
      -20℃

    QPS-201T

    QPS-201

    QPS-201B

    QPS-201C

    ¥325

    ¥1,500 

    ¥6,900 
     
     ¥12,700


    *包裝欄中所記載的反應次數是指50μl反應體系時的可使用次數。
    ※50×ROX Reference Dye與Master Mix分開包裝。
    ※大包裝(B包裝和C包裝)分別為5個和10個包裝的QPS-101/QPS-201。
    ※TaqMan?是Roche Molecular Systems Inc.的注冊商標。
    ※SYBR?是Molecular Probes Inc.的注冊商標
     

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