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    對于培養細胞樣品:

    使用前先融解RIPA裂解液。 根據樣品量取取適當量的裂解液,4°C放置,

    在使用前幾分鐘加入蛋白酶抑制劑,如加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。

    2. 對于貼壁細胞:去除培養液,用預冷PBS洗一遍,刮下細胞,  3000g離心5分鐘收集細胞

    (也可以直接在培養皿或培養板中加入裂解液),加入適量裂解液,按100萬個細胞中

    加入 100μL裂解液計算,如6孔板加入200-400ul裂解液 ,用移液器吹打數下,使得裂解液

    和細胞充分接觸;置于冰上孵育30分鐘,14000g離心10分鐘,取上清即為蛋白提取產物。


    3、對于懸浮細胞,先3000g 離心5分鐘收集細胞,用預冷的PBS洗一遍, 3000g 離心5min

    收集細胞,棄盡上清,細胞沉淀加入適量的預冷的裂解液,按100萬個細胞中加入 

    100μL裂解液計算。用移液器吹打數下,冰上孵育30分鐘, 14000g離心10分鐘,

    取上清,即為蛋白提取物。


    組織樣品:

    1.新鮮動物組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中,漂洗數次,洗凈組織血跡,用濾紙吸干組織

    表面液體,將組織快速剪切成細小的碎片。

    2、按20mg 組織加入200ul裂解液的比例加入預冷裂解液,

    3、用勻漿器勻漿組織,直至充分裂解,(如果裂解不充分可以添加更多裂解液)

    4、冰上孵育30分鐘,14000g離心10分鐘,取上清液即為蛋白抽提物。



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