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LGK-201
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    Ligation high Ver.2
    商家編碼:
    市 場 價:750.00
    售      價:750.00 - 2450.00 請登錄,確認是否享受優惠
    銷量:1 評價:0
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    本試劑是在原產品『Ligation high』基礎上改良的使用更方便的高效率單管型連接試劑。本試劑如右圖所示,即便是-20℃條件下保存也不會凍結。從冷凍柜中取出后可立即使用。使用方法與原產品一樣,只需在DNA樣品中加入1/2?等量的本品混合即可,非常簡便。可廣泛地用于突出末端、平滑末端、及TA克隆等用途。

    LGKh201d01090702

     

     特征
     

    特征1. 高效率
    TA克隆效率得到了大幅度的提高。
    在一般情況下,通過30分鐘以內的反應即可獲得足夠的陽性克隆*。(參照實驗例1)
    *標準的實驗步驟反應時間設定為30分鐘。

    特征2. 即便在-20℃保存也不會凍結
    從冷凍柜中取出后可立即使用。

    特征3. 簡便的單管型
    使用方法與原有產品一樣,只要將試劑和DN****段混合即可,非常簡便。

     
     實驗例
     

    實驗例1. TA克隆效率的比較

    將T載體<50ng>與λDNA的0.5kb PCR擴增片段(用Taq DNA polymerase擴增后純化)按1:3的摩爾比混合,16℃條件下進行30分鐘的連接反應,用Competent cell DH5α轉化后培養,第二天點白斑(確認插入)和藍斑數。下圖是以用Ligation high Ver.2出現的克隆數為100換算的比較圖。結果可知,用Ligation high Ver.2可進行高效率的TA克隆。 LGKh201d02090702

    實驗例2. DNA末端形狀與連接效率的關系

    在16℃條件下反應時,將DN****段(0.5kb)的克隆效率與末端形狀進行比較。結果可見,突出末端的連接約5分鐘即可完成,而平滑末端及TA克隆30分鐘約完成70?80%。另外,平滑末端克隆及TA克隆時間超過1小時,到2小時為止,連接效率會逐漸提高。因此當克隆效率比較低時,可將反應時間提高至2小時左右可提高連接效率。

    LGKh201d03090702

     ※各反應以60分鐘后白斑數為100作為標準。

     

    實驗例3.使用未經純化的PCR產物的TA克隆

    將T載體(50ng, 25fmol)和具有良好擴增效率的未純化PCR產物(用Taq DNA polymerase擴增的0.5kb片段)按照各種比例混合,在該DNA溶液〈7.5μl〉中添加Ligation high Ver.2〈7.5μl〉,在16℃條件下反應30分鐘。然后,用10μl反應液對E. coli DH5α感受態細胞〈100μl〉進行轉化,用LB/Amp(X-Gal)培養基培養后點克隆數。結果可見,盡量少帶入PCR反應液可得到良好的結果。 由于用純化后的DNA片段可得到高效率,因此當效率低下時,可使用純化后的PCR產物。 LGKh201d04090702
     
     
     相關信息
     

    <反應條件>
    各種用途的反應條件等,請參照
    產品說明書


    <注意>
    1.在?30℃以下長期保存,或在冷凍柜的冷氣出風口處保存時,可能會產生凍結現象。經實驗證明,5次反復凍融不會影響試劑活性,但注意請盡量不要使其凍結。產生凍結時,可用手指捏著離心管使其融解,但注意不要使其升溫。
    2.產生白色沉淀時也可按照上述方法將沉淀溶解后正常使用。
    3.擔心有可能產生凍結時,可事先將試劑分裝成若干管保存。


    <幾點建議>
    ●反應時間
    一般推薦16℃、30分鐘,但普通的突出末端連接通常只需5分鐘即可完成。當平滑末端或TA克隆的反應效率低下時,將反應時間延長至2小時左右通常可提高連接效率。

    ●反應液帶入
    鹽的帶入會影響到連接反應。在TA克隆時,未經純化的PCR產物的帶入為0.5?1μl(15μl反應體系)時,可獲得很高的連接效率。使用
    MagExtractor -PCR & Gel Clean up進行純化,TA克隆可獲得更高的效率。

    ●TA克隆效率
    如想獲得更高的連接效率,可使用磷酸化的引物進行PCR。關于引物的磷酸化,請參照
    這里

     
     參考文獻
     

    1)Richard L. Hawkins et al.,Current Microbiol.,38:335?341(1999)

     
     價格表
     

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     品名

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    價格

      高效率連接試劑
    Ligation high Ver.2
     750μl×1支  -20℃  LGK-201  RMB 750

    *每次使用量為3.75μl時,可使用200次。TA克隆時Ligation high Ver.2為7.5μl。 

     
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     價格

    高效率DN****段抽提試劑盒
    MagExtractor  -PCR& Gel Clean up-

    200次

    室溫

    NPK-601

    RMB     1,200    

     
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    【FAQ】
    Ligation high Ver.2

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